歡迎訪問聯碩生物官網!
購物車內有 0 件物品
細胞轉染的方法及常用步驟
來源于:上海聯碩生物科技有限公司,浙江聯碩生物科技有限公司 | 發布時間:2021/8/23 14:16:00

一、方法
1、脂質體轉染法
陽離子脂質體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過靜電作用,將DNA分子包裹入內,形成DNA脂復合物,也能被表面帶負電的細胞膜吸附,再通過融合或細胞內吞進入細胞。脂質體轉染適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中,是目前實驗室最方便的轉染方法之一,其轉染率較高,優于磷酸鈣法。由于脂質體對細胞有一定的毒性,所以轉染時間一般不超過24小時。常用細胞類型:cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。

2、電穿孔轉染法
電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內,這種方法就是電穿孔。當遇到某些脂質體轉染效率很低或幾乎無法轉入時建議用電穿孔法轉染。一般情況下,高電場強度會殺死50%-70% 的細胞?,F在針對細胞死亡開發出了一種電轉保護劑,可以大大的降低細胞的死亡率,同時提高電穿孔轉染效率。

3、病毒感染
對于脂質體轉染與電穿孔轉染都無法成功轉染的細胞系建議用病毒感染,此法可以快速100%感染,檢測成功率高。

二、常用步驟
1. 轉染試劑的準備
① 將400ul去核酸酶水加入管中,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存,使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質體  體積:DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA,震蕩后在加入合適體積的轉染試劑,再次震蕩。
3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。
4. 吸去培養板中的培養基,用PBS或者無血清培養基清洗一次。
5. 加入混合液,將細胞放回培養箱中培養一個小時。
6. 到時后,根據細胞種類決定是否移除混合液,之后加入完全培養基繼續培養24-48小時。

相關科研教學