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做ELISA實驗,這些技巧少不了!
來源于:上海聯碩生物科技有限公司,浙江聯碩生物科技有限公司 | 發布時間:2020/8/14 10:05:00

介紹:

ELISA試劑盒在國內有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。

Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。

 

特點:

1.高效、靈敏、特異的抗體。

2.穩定的重復性和可靠性。

3.吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體。

4.適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等多種標本類型。

5.節省實驗經費。

 

操作方法

1.標準品的稀釋,請按照說明書進行操作。

2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

3. 加樣:不規范的移液操作可能帶來誤差。

1)空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗NE抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;

2)標準品孔:加入標準品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);

3)待測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗NE抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。

7. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

8. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后10分鐘以內進行。

9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。

 

洗板方法

一、手工洗板方法:

甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。 

二、自動洗板:

如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

 

注意事項

1.從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。

3.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

4.為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。

5.不同批次試劑盒不能混用,如遇試劑不夠,請及時聯系客服解決

6.底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

7.中、英文說明書或許會有不一致之處,請以英文說明書為準。  

8.保存溫度:2-8℃。

9.有效期:6個月(2-8℃)。

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